一种乙酰半胱氨酸液体制剂中依地酸二钠的含量测定方法与流程

文档序号:19943685发布日期:2020-02-14 23:39
一种乙酰半胱氨酸液体制剂中依地酸二钠的含量测定方法与流程
本发明属于医药检测
技术领域
,涉及一种药物中金属螯合剂的检测方法,具体涉及一种乙酰半胱氨酸液体制剂中依地酸二钠的含量测定方法。
背景技术
:目前,依地酸二钠作为一种常用药用辅料,收载于中国药典、英国药典及欧洲药典等,其具有如下面的结构式(i)所示的结构:分子式:cl0h14n2na2o8·2h2o;分子量:372.23。依地酸二钠含量的常规测定方法为络合滴定法,其中中国药典具体测定方法为:取本品约0.4g,精密称定,加水40ml使溶解,加氨-氯化铵缓冲液(ph10.0)10ml,以锌滴定液(0.05mol/l)滴定,近终点时加少量铬黑t指示剂,继续滴定至溶液由蓝色变成紫红色。每1ml锌滴定液(0.05mol/l)相当于18.61mg的cl0h14n2na2o8·2h2o。由于药物制剂中依地酸二钠浓度较低,络合滴定法无法满足含量测定的要求。吸入用乙酰半胱氨酸溶液,作为乙酰半胱氨酸液体制剂的一种,其由意大利赞邦开发,并于1965年于意大利上市,规格为3ml:0.3g,主要用于治疗浓稠粘液分泌物过多的呼吸道疾病如:急性支气管炎、慢性支气管炎及其病情恶化者、肺气肿、粘稠物阻塞症以及支气管扩张症,其作用机理为分子中含有巯基,能使黏蛋白肽键的二硫键(-s-s-)断裂,从而使黏蛋白链变成小分子肽链,降低粘蛋白的黏滞性,因此本品为黏痰、脓性痰、呼吸道黏液的溶解药。乙酰半胱氨酸如下面的结构式(ⅱ)所示:由于乙酰半胱氨酸结构式上含游离型巯基,导致其对金属离子特别敏感,在金属离子存在的条件下极易发生降解,而作为药用辅料的依地酸二钠具有广泛的配位性能,几乎能与所有的金属离子形成稳定的螯合物。因此吸入用乙酰半胱氨酸溶液原研制剂中加入依地酸二钠作为金属离子螯合剂,用于提高产品的稳定性,但处方中依地酸二钠对粘膜和上呼吸道有一定的刺激作用,为确保产品的安全、有效,需对依地酸二钠含量进行严格控制,以质量体积比(g/ml)计,其用量范围一般为0.005%~0.05%。cn201510638593公开了一种丁酸氯维地平注射乳剂中依地酸二钠的检测方法,该方法采用高效色谱法对依地酸二钠含量进行测定,其中优选的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,检测波长为254nm,柱温为35℃,流动相分别由有机相与水相组成的a相及b相,并采用梯度洗脱。采用该方法对吸入用乙酰半胱氨酸溶液中依地酸二钠的含量进行测定时发现,制剂中有效成分乙酰半胱氨酸对依地酸二钠测定产生严重的干扰,无法准确进行定量。另外,该专利申请文件还公开了对照品溶液的制备方法,但在对照品溶液制备过程中需要加入制剂中除依地酸二钠外其他所有成份,在日常检验带来了极大的不便。cn201510305734公开了一种参芪扶正注射液中依地酸二钠的定量检测方法,该方法为离子色谱法,优选的色谱条件为:色谱柱为as11-hc(4×250mm),淋洗液为11.5mmol/l的氢氧化钾溶液,检测器为电导检测器。采用该方法对吸入用乙酰半胱氨酸溶液中依地酸二钠的含量进行测定时发现,同样存在有效成分乙酰半胱氨酸对依地酸二钠测定产生严重干扰的现象,无法满足含量测定的相关要求。因此,现有技术无法满足对吸入用乙酰半胱氨酸溶液中依地酸二钠进行准确定量的要求。技术实现要素:基于上述现有技术的不足,本发明提供一种专属性强、重现性良好,且操作简单的检测方法,用于乙酰半胱氨酸液体制剂中金属离子螯合剂依地酸二钠的含量测定。本发明提供了一种乙酰半胱氨酸液体制剂中依地酸二钠的含量测定方法,该方法包括以下步骤:(1)制备供试品溶液,所述供试品溶液为包括如下原料的配制品:乙酰半胱氨酸液体制剂、环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相;(2)测定:采用高效液相色谱(hplc)法,以氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,以离子对缓冲液与有机相的混合液作为流动相,测定上述供试品溶液中依地酸二钠的含量。根据本发明,所述依地酸二钠是乙二胺四醋酸二钠或其水合物,例如二水合物,分子式为cl0h14n2na2o8·2h2o。根据本发明,所述乙酰半胱氨酸液体制剂可以选自乙酰半胱氨酸注射液、乙酰半胱氨酸口服液、吸入用乙酰半胱氨酸溶液;示例性地,所述乙酰半胱氨酸液体制剂为吸入用乙酰半胱氨酸溶液。优选地,所述吸入用乙酰半胱氨酸溶液包括乙酰半胱氨酸、依地酸二钠和氢氧化钠。进一步地,以质量体积百分比计(g/ml),所述吸入用乙酰半胱氨酸溶液包括:乙酰半胱氨酸10~20%,依地酸二钠0.005~0.05%,氢氧化钠2.5~5%。示例性地,所述吸入用乙酰半胱氨酸溶液购自美国americanregent,inc公司。根据本发明,所述供试品溶液中依地酸二钠的浓度为0.005~0.05mg/ml;例如,浓度为0.01~0.03mg/ml;示例性地,浓度为0.015mg/ml、0.025mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml。根据本发明,所述环糊精包括α-、β-或γ-环糊精,所述环糊精衍生物包括但不限于α-、β-、γ-环糊精醚衍生物、酯衍生物、聚合物等中的一种、两种或更多种;例如,所述醚衍生物选自葡萄糖衍生物、羟丙基衍生物、甲基衍生物等中的一种、两种或更多种;示例性地,所述衍生物选自羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精等中的一种、两种或更多种。优选地,供试品溶液中所述环糊精或环糊精衍生物的浓度为2~20mg/ml;例如,浓度为5~15mg/ml;示例性地,浓度为7mg/ml、10mg/ml、18mg/ml。根据本发明,供试品溶液中所述fe3+的质量浓度为0.02~0.2%;例如0.05~0.15%;示例性地,浓度为0.1%、0.12%、0.18%。根据本发明,所述fe3+溶液,可以是三氯化铁溶液、硫酸铁溶液、硝酸铁溶液、磷酸铁溶液等。优选三氯化铁溶液;例如,加入质量浓度0.1~1%的三氯化铁溶液配置供试品溶液;示例性地,加入质量浓度0.5%的三氯化铁溶液。优选地,所述fe3+溶液是酸性溶液,优选ph为4以下、更优选为1.2~2.0,所述酸性溶液通过加入酸来制备,优选所述酸是与fe3+溶液中的成盐离子相同的那些酸,例如三氯化铁溶液、硫酸铁溶液、硝酸铁溶液、磷酸铁溶液分别加入盐酸、硫酸、硝酸、磷酸,优选三氯化铁盐酸溶液。优选地,所述离子对缓冲液为包含十四烷基溴化铵和四庚基溴化铵的缓冲液。优选地,缓冲液中所述十四烷基溴化铵的质量浓度为0.05%~2%;示例性地,浓度为0.1%、0.2%、1%、2%。优选地,缓冲液中所述四庚基溴化铵的质量浓度为0.025~1%;示例性地,浓度为0.05、0.1%、0.5%、1%。优选地,所述有机相为甲醇或乙腈。优选地,所述离子对缓冲液与有机相的体积比为(70~95):(5~30);例如,体积比为(75~90):(10~25)、(80~90):(10~20);示例性地,体积比为90:10、85:15、80:20、78:22、87:13。优选地,所述流动相的ph值在1.0~5.0之间;例如在1.0~3.0之间;示例性地,ph值为1.5、2.0、2.5。根据本发明,采用酸对流动相的ph值进行调节;所述酸可以选用盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、甲酸等中的至少一种;优选为磷酸。根据本发明,所述高效液相色谱法的色谱条件为:柱温:20~40℃,例如25~35℃,示例性地,为30℃;检测波长:240~280nm,例如250~270nm,示例性地,为257nm;流动相的流速:0.5~2ml/min,例如0.8~1.6ml/min,示例性地,流速为0.5ml/min、1.0ml/min、2.0ml/min;进样量:5~50μl,例如10~30μl,示例性地,为5μl、20μl、50μl。根据本发明,该方法还包括制备对照品溶液,所述对照品溶液为包括如下原料的配制品:依地酸二钠对照品、流动相、环糊精和/或环糊精衍生物和fe3+溶液。优选地,所述依地酸二钠、流动相、环糊精和/或环糊精衍生物和fe3+溶液具有如上文所述的含义。优选地,所述对照品溶液中依地酸二钠、环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+的浓度与上述供试品溶液中各物质的浓度保持一致。根据本发明的技术方案,所述乙酰半胱氨酸液体制剂中依地酸二钠含量的测定方法,该方法具体包括以下步骤:(1)测试溶液制备:供试品溶液制备:量取乙酰半胱氨酸液体制剂,将其与环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相混合均匀,得到供试品溶液;对照品溶液制备:取依地酸二钠水溶液,与环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+和流动相混合均匀,得到对照品溶液;(2)测定:采用高效液相色谱(hplc)法,以氨基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,以离子对缓冲液与有机相的混合液作为流动相,测定上述供试品溶液中依地酸二钠的含量。本发明还提供一种上述测定方法中所用的供试品溶液,所述供试品溶液为包括如下原料的配制品:乙酰半胱氨酸液体制剂、环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相。优选地,所述乙酰半胱氨酸液体制剂、环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相均具有如上文所述的含义。进一步的,本发明还提供上述供试品溶液的制备方法,该方法包括步骤:取乙酰半胱氨酸液体制剂,与环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相混合,得到供试品溶液。优选地,所述乙酰半胱氨酸液体制剂、环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相均具有如上文所述的含义。优选地,所述乙酰半胱氨酸液体制剂与环糊精和/或环糊精衍生物的体积质量比为0.001~0.1ml/mg;例如0.01~0.05ml/mg;示例性地,体积质量比为0.01、0.02、0.03、0.04ml/mg。优选地,所述fe3+可以通过加入铁盐溶液,所述药物溶液与铁盐溶液的体积比为0.05~5;例如0.5~3、1.0~2.5;示例性地,体积比为0.5、1.5、2.0。根据本发明的技术方案,所述供试品溶液的制备方法,具体操作包括步骤:精密量取乙酰半胱氨酸液体制剂0.2~2ml,与环糊精和/或环糊精衍生物20~200mg、质量浓度为0.1~1%的铁盐溶液混合,最后加入流动相定容至10ml,滤过即得。根据本发明示例性的技术方案,所述供试品溶液的制备方法,具体操作包括步骤:精密量取吸入用乙酰半胱氨酸溶液0.2~2ml,与羟丙基-β-环糊精20~200mg、质量浓度为0.1~1%的三氯化铁溶液混合,最后加入流动相定容至10ml,滤过即得。本发明还提供一种上述测定方法中所用的对照品溶液,所述对照品溶液为包括如下原料的配制品:依地酸二钠、流动相、环糊精和/或环糊精衍生物和fe3+溶液。优选地,所述依地酸二钠、流动相、环糊精和/或环糊精衍生物和fe3+溶液具有如上文所述的含义。进一步的,本发明还提供上述对照品溶液的制备方法,该方法包括:取依地酸二钠水溶液,与环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相混合,得到对照品溶液。优选地,所述依地酸二钠水溶液的质量浓度为0.1~0.5ml/mg;例如0.15~0.4ml/mg、0.2~0.3ml/mg;示例性地,浓度为0.25ml/mg。优选地,所述依地酸二钠、环糊精和/或环糊精衍生物、fe3+溶液和流动相均具有如上文所述的含义。优选地,所述依地酸二钠水溶液与环糊精和/或环糊精衍生物的体积质量比为0.001~0.1ml/mg;例如0.01~0.05ml/mg;示例性地,体积质量比为0.01、0.02、0.03、0.04ml/mg。优选地,所述fe3+可以通过加入铁盐溶液,所述依地酸二钠水溶液与铁盐溶液的体积比为0.05~5;例如0.5~3、0.5~2.5;示例性地,体积比为0.5、1.5、2.0。根据本发明的技术方案,所述对照品溶液的制备方法具体包括:精密量取依地酸二钠水溶液0.2~2ml,与环糊精和/或环糊精衍生物20~200mg、质量浓度为0.1~1%的铁盐溶液混合,最后加入流动相定容至10ml,滤过即得。根据本发明示例性的技术方案,所述对照品溶液的制备方法具体操作包括步骤:精密量取依地酸二钠水溶液0.2~2ml,与羟丙基-β-环糊精20~200mg、质量浓度为0.1~1%的三氯化铁溶液混合,最后加入流动相定容至10ml,滤过即得。本发明的有益效果是:在测定药物组合物中依地酸二钠的含量时,因药物组分多样性会对依地酸二钠的检测产生干扰,而不能精确测量其含量。例如乙酰半胱氨酸液体制剂中,乙酰半胱氨酸会对制剂中依地酸二钠的测定产生干扰,尤其是吸入用乙酰半胱氨酸溶液制剂中乙酰半胱氨酸的浓度较高(浓度约为100mg/ml),会对依地酸二钠的测定产生严重干扰。而本发明的hplc色谱检测方法,可有效消除乙酰半胱氨酸对依地酸二钠测定的干扰。进一步的,本发明方法针对乙酰半胱氨酸液体制剂,尤其是吸入用乙酰半胱氨酸溶液中依地酸二钠含量进行测定,其色谱条件容易实现,分析灵敏度高,供试品、对照品稳定性高、方法重现性好,检测结果精确可靠,能够更好地控制吸入用乙酰半胱氨酸溶液的产品质量。附图说明图1是实施例3吸入用乙酰半胱氨酸溶液中依地酸二钠含量测定供试品溶液hplc色谱图。图2是实施例3吸入用乙酰半胱氨酸溶液中依地酸二钠含量测定对照品溶液hplc色谱图。图1和图2中横坐标代表:时间(分钟)。具体实施方式下文将结合具体实施例对本发明的测定方法做更进一步的详细说明。应当理解,下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明,而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。除非另有说明,以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品,或者可以通过已知方法制备。实施例所用仪器和原料:液相色谱仪:waters高效液相色谱仪2695型;吸入用乙酰半胱氨酸溶液:购自美国americanregent,inc公司。对照品依地酸二钠:ep标准品;依地酸二钠为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。实施例11、色谱条件:色谱柱:以氨基硅烷键合硅胶为填充剂,安捷伦4.6×250mm,填料颗粒直径5μm;柱温:25℃;流动相:以含0.1%十四烷基溴化铵、0.05%四庚基溴化铵的溶液(磷酸调节ph至2.0)-甲醇(体积比95:5)为流动相;流速:2ml/min;进样体积:5μl;检测波长:240nm。2、测试溶液制备:(1)供试品溶液制备:精密量取吸入用乙酰半胱氨酸溶液0.2ml,置10ml量瓶中,加羟丙基-β-环糊精20mg,再加0.5%三氯化铁溶液0.4ml,最后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得供试品溶液。(2)对照品溶液制备:取依地酸二钠25mg,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取0.2ml,置10ml量瓶中,加羟丙基-β-环糊精20mg,再加0.5%三氯化铁溶液0.4ml,最后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得对照品溶液。3、测定:精密量取供试品溶液及对照品溶液各5μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算依地酸二钠含量。实施例21、色谱条件:色谱柱:以氨基烷基硅烷键合硅胶为填充剂,安捷伦4.6×250mm,填料颗粒直径5μm;柱温:35℃;流动相:以含2%十四烷基溴化铵、1%四庚基溴化铵的溶液(磷酸调节ph至3.0)-甲醇(体积比70:30)为流动相;流速:0.5ml/min;进样体积:50μl;检测波长:280nm。2、测试溶液制备:(1)供试品溶液制备:精密量取吸入用乙酰半胱氨酸溶液2ml,置10ml量瓶中,加羟丙基-β-环糊精200mg,再加0.5%三氯化铁溶液4ml,最后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得供试品溶液。(2)对照品溶液制备:取依地酸二钠25mg,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取2ml,置10ml量瓶中,加羟丙基-β-环糊精200mg,再加0.5%三氯化铁溶液4ml,最后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得对照品溶液。3、测定:精密量取供试品溶液及对照品溶液各50μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算依地酸二钠含量。实施例31、色谱条件:色谱柱:以氨基烷基硅烷键合硅胶为填充剂,安捷伦4.6×250mm,填料颗粒直径5μm;柱温:30℃;流动相:以含0.2%十四烷基溴化铵、0.1%四庚基溴化铵的溶液(磷酸调节ph至1.5)-甲醇(体积比90:10)为流动相;流速:1ml/min;进样体积:20μl;检测波长:257nm。2、测试溶液配制:(1)供试品溶液制备:精密量取吸入用乙酰半胱氨酸溶液1ml,置10ml量瓶中,加羟丙基-β-环糊精100mg,再加0.5%三氯化铁溶液2ml,最后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得供试品溶液。(2)对照品溶液制备:取依地酸二钠25mg,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取1ml,置10ml量瓶中,加羟丙基-β-环糊精100mg,再加0.5%三氯化铁溶液2ml,最后加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得对照品溶液。3、测定:精密量取供试品溶液及对照品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算依地酸二钠含量。实施例4方法学考察4.1、线性关系4.1.1试验设计取依地酸二钠对照品25mg,精密称定,置于50ml量瓶中,加水振摇使溶解,并加水稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml、2ml、3ml、5ml、10ml置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,分别精密量取上述配制的溶液1ml置不同10ml量瓶中,再分别向每个量瓶中加入羟丙基-β-环糊精100mg、0.5%三氯化铁溶液2ml,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密量取上述对照品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。4.1.2试验结果试验结果如表1所示。表1.4.1.3试验结论在5.024μg/ml~50.24μg/ml浓度范围内,依地酸二钠峰面积与浓度呈良好的线性关系。4.2准确度4.2.1试验设计参照实施例3制备对照品溶液。另取依地酸二钠对照品20mg、25mg、30mg,精密称定,各3份,分别置100ml量瓶中,加空白辅料溶液(溶液组分:乙酰半胱氨酸和氢氧化钠,乙酰半胱氨酸和氢氧化钠的用量与吸入用乙酰半胱氨酸溶液中二者的含量相同)振摇使溶解,并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取1ml置10ml量瓶中,加入羟丙基-β-环糊精100mg、0.5%三氯化铁溶液2ml,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密量取对照品溶液及供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。4.2.2试验结果试验结果如表2所示。表2.4.2.3试验结论依地酸二钠含量测定方法平均回收率99.19%,rsd值为1.33%,符合相关要求。4.3、溶液稳定性4.3.1试验设计参照实施例3制备对照品溶液和供试品溶液。分别于第0、2、4、6、8、12、24h,精密量取对照品溶液及供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积变化情况考察对照品溶液及供试品溶液稳定性。4.3.2试验结果试验结果如表3所示。表3.时间(h)02481224rsd对照品峰面积7588247550487539857600377564437622120.42%供试品峰面积7564457535617510357600857523397597720.51%4.3.3试验结论对照品溶液及供试品溶液在24h内稳定性良好。4.4重复性为进一步验证所述方法的重复性,采用实施例3中的色谱条件及溶液制备方法对自制样品中依地酸二钠的含量进行了测定,平行操作6次,试验结果表明,6次试验结果的rsd为0.53%,符合相关要求,具体结果详见表4。表4.依地酸二钠含量测定重复性试验(单位:%)编号123456均值rsd含量99.55100.398.999.299.6100.199.610.53以上,对本发明的实施方式进行了说明。但是,本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3 
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